การใช้เทคนิค LOOP-MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION; LAMP ตรวจหาเชื้อ COLLETOTRICHUM GLOEOSPORIOIDES ในมะม่วงน้ำดอกไม้
คำสำคัญ:
แอนแทรคโนส, ดีเอ็นเอไบโอเซ็นเซอร์, แลมป์บทคัดย่อ
การศึกษาเทคนิคทางด้านอณูพันธุศาสตร์ในการตรวจสอบเชื้อ Colletotrichum gloeosporioides ในมะม่วงน้ำดอกไม้ มีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาวิธีการตรวจวิเคราะห์เชื้อรา C. gloeosporioides ที่ก่อโรคแอนแทรคโนสในมะม่วงน้ำดอกไม้ ด้วยเทคนิค Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) โดยงานวิจัยนี้ได้ศึกษาลักษณะของเชื้อรา C. gloeosporioides การตรวจวิเคราะห์ด้วยวิธี LAMP รวมทั้งการตรวจสอบค่าความไวและความจำเพาะของเชื้อ C. Gloeosporioides จากการศึกษามะม่วงน้ำดอกไม้ที่แสดงอาการของโรคแอนแทรคโนสที่มีสาเหตุมาจากเชื้อ C. gloeosporioides พบว่า เชื้อเจริญได้ช้าบนอาหารเลี้ยงเชื้อ Potato dextrose agar (PDA) โคโลนีมีสีขาวอมเทา โคนิเดียเป็นเซลล์เดียว รูปไข่ และไม่มีสี สร้างสปอร์รูปทรงกระบอก การทดสอบการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอเป้าหมายของเชื้อด้วยเทคนิค LAMP พบว่า สามารถตรวจวิเคราะห์เชื้อได้รวดเร็ว จากการทดลองสามารถพบได้ 20 ตัวอย่าง การทดสอบค่าความไว พบว่า ความไวของเชื้อที่ตรวจสอบได้ คือ 50x10-4 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร และการตรวจวิเคราะห์ความจำเพาะของเชื้อ พบว่าสามารถตรวจเชื้อ C. gloeosporioides ได้อย่างจำเพาะ โดยไม่จับกับเชื้อชนิดอื่น วิธีตรวจวิเคราะห์เชื้อด้วยเทคนิคแลมป์เป็นการตรวจดีเอ็นเอในระดับอณูชีววิทยาซึ่งมีความแม่นยำสูง และสะดวกรวดเร็ว สามารถวิเคราะห์ตัวอย่างได้เป็นจำนวนมากโดยใช้ปริมาณดีเอ็นเอเพียงเล็กน้อย
References
Arauz, L.F. (2000). Mango Anthracnose: Economic Impact and Current Options For Integrated Managaement. Plant Dis, 84(6), 600-611.
De Guzman Alvindia, D., & Mangoba, M.A.A. (2020). Bioactivities of Allium longicuspis Regel against anthracnose of mango caused by Colletotrichum gloeosporioides (Penz.). Sci Rep, 10(1), 11367.
Fu, F.F., Hao, Z., Wang, P., Lu, Y., Xue, L. J., Wei, G., . . . Chen, J. (2020). Genome Sequence and Comparative Analysis of Colletotrichum gloeosporioides Isolated from Liriodendron Leaves. Phytopathology, 110(7), 1260-1269.
Fu, S., Qu, G., Guo, S., Ma, L., Zhang, N., Zhang, S., . . . Shen, Z. (2011). Applications of loop-mediated isothermal DNA amplification. Appl Biochem Biotechnol, 163(7), 845-850.
Ganogpichayagrai, A., Rungsihirunrat, K., Palanuvej, C., & Ruangrungsi, N. (2016). Characterization of Mangifera indica cultivars in Thailand based on macroscopic, microscopic, and genetic characters. J Adv Pharm Technol Res, 7(4), 127-133.
Harju, S., Fedosyuk, H., & Peterson, K.R. (2004). Rapid isolation of yeast genomic DNA: Bust n' Grab. BMC Biotechnol, 4, 8.
Kwodaga, J.K., Sowley, E.N.K., & Badii, B.K. (2020). Morphological and molecular characterisation of Colletotrichum gloeosporioides (Penz) isolates obtained from Dioscorea rotundata (Poir). African Journal of Biotechnology, 19(5), 231-239.
Lan, C., Yao, J., Yang, X., Ruan, H., Yu, D., & Jiang, J. (2020). Specific and sensitive detection of the guava fruit anthracnose pathogen (Colletotrichum gloeosporioides) by loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay. Can J Microbiol, 66(1), 17-24.
Mori, Y., Nagamine, K., Tomita, N., & Notomi, T. (2001). Detection of loop-mediated isothermal amplification reaction by turbidity derived from magnesium pyrophosphate formation. Biochem Biophys Res Commun, 289(1), 150-154.
Notomi, T., Okayama, H., Masubuchi, H., Yonekawa, T., Watanabe, K., Amino, N., & Hase, T. (2000). Loop-mediated isothermal amplification of DNA. Nucleic Acids Res, 28(12), E63.
Ren, Y., Xue, Y., Tian, D., Zhang, L., Xiao, G., & He, J. (2020). Improvement of Postharvest Anthracnose Resistance in Mango Fruit by Nitric Oxide and the Possible Mechanisms Involved. J Agric Food Chem, 68(52), 15460-15467.
Tovar-Pedraza, J.M., Mora-Aguilera, J.A., Nava-Diaz, C., Lima, N.B., Michereff, S.J., Sandoval-Islas, J.S., . . . Leyva-Mir, S.G. (2020). Distribution and Pathogenicity of Colletotrichum Species Associated With Mango Anthracnose in Mexico. Plant Dis, 104(1), 137-146.
Wang, S., Ye, W., Tian, Q., Dong, S., & Zheng, X. (2017). Rapid detection of Colletotrichum gloeosporioides using a loop-mediated isothermal amplification assay. Australasian Plant Pathol, 46, 493–498.
Wu, J.Y., Hu, X.R., & Zhang, C.Q. (2019). Molecular Detection of QoI Resistance in Colletotrichum gloeosporioides Causing Strawberry Anthracnose Based on Loop-Mediated Isothermal Amplification Assay. Plant Dis, 103(6), 1319-1325.
Downloads
เผยแพร่แล้ว
How to Cite
ฉบับ
บท
License
กองบรรณาธิการขอสงวนสิทธิ์ในการปรับปรุงแก้ไขตัวอักษรและคำสะกดต่างๆ ที่ไม่ถูกต้อง และต้นฉบับที่ได้รับการตีพิมพ์ในวารสาร PSRU Journal of Science and Technology ถือเป็นกรรมสิทธิ์ของคณะวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยี มหาวิทยาลัยราชภัฏพิบูลสงคราม และ
ผลการพิจารณาคัดเลือกบทความตีพิมพ์ในวารสารให้ถือมติของกองบรรณาธิการเป็นที่สิ้นสุด
0-5526-7000 Ext. 4100
