การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ และการส่งถ่ายยีนเข้าสู่ต้นปทุมรัตน์ (Curcuma sp.) โดยใช้ Agrobacterium tumefaciens

บทคัดย่อ

ปทุมรัตน์ (Curcuma sp.) เป็นพืชที่มีศักยภาพในการพัฒนาเป็นพืชเศรษฐกิจ แต่เนื่องจากยังไม่มีการศึกษาวิธีการที่เหมาะสมในการส่งถ่ายยีนเข้าสู่ต้นปทุมรัตน์ รายงานนี้จึงศึกษาการเพาะเลี้ยงชิ้นส่วนต้นอ่อนของ ปทุมรัตน์บนสูตรอาหาร MS ที่เติมสารควบคุมการเจริญเติบโตในกลุ่มไซโตไคนินชนิด TDZ ความเข้มข้น 0.0, 0.1 และ 0.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ร่วมกับ IMA ความเข้มข้น 0, 2 และ 4 มิลลิกรัมต่อลิตร เพาะเลี้ยงเป็นเวลา 2 เดือน พบว่า ชิ้นส่วนต้นอ่อนปทุมรัตน์ที่เพาะเลี้ยงบน อาหารสูตร MS ที่เติม TDZ ความเข้มข้น 0.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ร่วมกับ IMA ความเข้มข้น 4 มิลลิกรัมต่อลิตร สามารถชักนําให้เกิดการสร้างต้นอ่อนได้มากที่สุด 12 ต้นต่อต้นหลัก และศึกษาความเหมาะสมของ Agrobacterium tumefaciens และเวลาที่ใช้ในการปลูกถ่ายเชื้อ เพื่อเป็นพื้นฐานในการพัฒนาการส่งถ่ายยีนของต้นปทุมรัตน์ต่อไป ในการศึกษาใช้ A. tumefaciens สายพันธุ์ AGLO ที่มีพลาสมิด pBI121 ซึ่งมียีน neomycin phosphotransferase (nptII) เป็นยีนเครื่องหมายเพื่อการคัดเลือก และยีน α- glucuronidase (gus) เป็นยีนรายงานผล จากการเลี้ยงเชื้อในอาหารสูตร MS ที่เติม TDZ ความเข้มข้น 0.5 มิลลิกรัมต่อลิตร ร่วมกับ IMA ความเข้มข้น 4 มิลลิกรัมต่อลิตรเป็นเวลา 3 วัน ก่อนนํามาเลี้ยงในอาหารคัดเลือกที่มี kanamycin เป็นเวลา 2 เดือน จากการนําใบของต้นที่รอดชีวิตมาตรวจสอบการแสดงออกของยีน gus พบว่าการใช้ A. tumefaciens สายพันธุ์ AGLO และเขย่ารวมกับต้นอ่อนของปทุมรัตน์ นาน 30 นาที พบขึ้นส่วนที่มีการแสดงออกของ ยีน gus 73.33 เปอร์เซ็นต์