การแยกบริสุทธิ์และศึกษาคุณสมบัติบางประการของไลโซไซม์ชนิด G จากไข่ขาวของไข่นกกระจอกเทศ

บทคัดย่อ

ในการวิจัยครั้งนี้ได้ทำการแยกบริสุทธิ์ไลโซไซม์ชนิด G จากไข่ขาวของไข่นกกระจอกเทศ (Ostrich egg white lysozyme; OEWL) โดยการตกตะกอนโปรตีนชนิดอื่นออกด้วยคุณสมบัติของค่า isoelectric point (pI) ของโปรตีน และนำมาแยกบริสุทธิ์ต่อด้วย CM-Toyopearl 650M cation-exchange chromatography ร่วมกับ Sephadex-G75 gel filtration ทำการตรวจสอบความบริสุทธิ์และวิเคราะห์ขนาดโมเลกุลของโปรตีนด้วยเทคนิค SDS-PAGE ผลการทดลองพบว่าโปรตีนที่แยกบริสุทธิ์เป็นไลโซไซม์ที่มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 21 kDa ทำการยืนยันกิจกรรมการทำงาน (activity) ของไลโซไซม์ที่แยกบริสุทธิ์ได้ต่อการยับยั้งเชื้อ Micrococcus lysodeikticus ด้วยเทคนิค refolding gel ผลการทดลองแสดงโซนใส (clear zone) ที่โปรตีนขนาด 21 kDa สามารถยืนยันได้ว่าเอนไซม์ที่ทำบริสุทธิ์ได้นั้นเป็นไลโซไซม์ซึ่งสามารถย่อยผนังเซลล์แบคทีเรียที่เป็นซับสเตรตได้จากการวิเคราะห์ค่า isoelectric point (pI) ด้วยเทคนิค 2D-PAGE พบว่า OEWL มีค่า pI ประมาณ 9.95 เมื่อทำการศึกษา pH (optimum pH) และอุณหภูมิ (optimum temperature) ที่เหมาะสมในการทำงานของ OEWL พบว่า OEWL มีค่า pH ที่เหมาะสมในการทำงาน 2 ค่า คือ pH 4 และ7 และพบอุณหภูมิ 30 ºC เป็นอุณหภูมิที่มีความเหมาะสมสำหรับกิจกรรมของเอนไซม์ OEWL จากผลการทดลองเบื้องต้นพบว่าไลโซไซม์ชนิด G จากไข่ขาวของไข่นกกระจอกเทศที่ทำบริสุทธิ์ได้มีค่า specific activity สูงสุดที่ 60.23 unit/mg และมีค่ากิจกรรมการทำงานของเอนไซม์ที่ 1,680.30 unit จากผลการวิจัยทั้งหมดพบว่าสามารถแยกบริสุทธิ์ไลโซไซม์ชนิด G จากไข่ขาวของไข่นกกระจอกเทศให้มีความบริสุทธิ์เพียงพอต่อการยังยั้งเชื้อแบคทีเรียได้อย่างมีประสิทธิภาพ และสามารถนำไลโซไซม์ชนิด G จากไข่ขาวของไข่นกกระจอกเทศไปประยุกต์ใช้ในการพัฒนาต่อยอดเป็นผลิตภัณฑ์ผลิตภัณฑ์ทางเลือกในการป้องกันการติดเชื้อ รวมถึงผลิตภัณฑ์เวชสำอาง เช่น เจลแต้มสิวได้ในอนาคต