The Modified Cultured Method for Siamese Crocodile (Crocodylus siamensis) Primary Cell Culture derived from Eyelid and Blood Vessel

บทคัดย่อ

จระเข้น้ำจืดพันธุ์ไทย (Crocodylus siamensis) เป็นจระเข้น้ำจืดที่พบได้ในภูมิภาคเอเชียตะวันออกเฉียงใต้ ประเทศไทยในอดีตอาจพบได้ตามธรรมชาติ และได้ถูกจัดอยู่ในกลุ่มเสี่ยงใกล้สูญพันธุ์ขั้นวิกฤตโดยสหภาพนานาชาติเพื่อการอนุรักษ์ธรรมชาติและทรัพยากรธรรมชาติ (IUCN) ซึ่งในประเทศไทยนั้นมีการอนุญาตให้มีการทําฟาร์มเพาะเลี้ยงเพื่อที่จะอนุรักษ์พันธุกรรมของพันธุ์แท้ และเพื่อเป้าหมายอื่นที่มีเหตุผล อย่างไรก็ตามความบริสุทธิ์ของจระเข้น้ำจืดพันธุ์ไทย ปัจจุบันลดลงมากเนื่องจากมีการผสมข้ามกับจระเข้พันธุ์น้ำเค็มซึ่งพบในหลายๆ ฟาร์ม วัตถุประสงค์ของการศึกษาครั้งนี้เพื่อศึกษาการเพาะเลี้ยงเซลล์ของจระเข้น้ำจืดพันธุ์ไทยโดยการปรับวิธีการเพาะเลี้ยงเซลล์ปฐมภูมิเพื่อใช้ประโยชน์ในการศึกษาต่อไปในด้านโครโมโซม การเป็นเซลล์เจ้าบ้านที่มีความจําเพาะต่อโรค และเป็นแหล่งทรัพยากรสําหรับการเป็นเครื่องมือในการวินิจฉัยอื่นๆ ตัวอย่างหนังตาและหลอดเลือดได้มาจากจระเข้ที่ได้รับบาดเจ็บและเสียชีวิตจากการต่อสู้กันเอง โดยตัวอย่างที่ถูกตัดย่อยเป็นชิ้นเล็กๆ ถูกนําไปเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเซลล์ 2 สูตร คือสูตร 1) ไอเอ็มดีเอ็ม (Iscove's Dulbecco’s Modified Eagle Medium) และเติมซีรั่มลูกวัว 10% และสูตร 2) ไอเอ็มดีเอ็ม ซึ่งเติมพลาสมาของจระเข้ 10% โดยทั้งสองสูตรมียาปฏิชีวนะและสารป้องกันเชื้อราเพื่อป้องกันการปนเปื้อนชื้อจุลินทรีย์จากนั้นนําไปเลี้ยงที่อุณหภูมิที่แตกต่างกันคือที่ 28 °C และ 37 °C ในตู้เลี้ยงเซลล์ซึ่งมีคาร์บอนไดออกไซด์ 5% พบว่าเมื่อตรวจสอบด้วยกล้องจุลทรรศน์ชนิดหัวกลับ ใน 2 สัปดาห์หลังการเพาะแยกเซลล์พบเซลล์ลักษณะไฟโบรบลาสต์ (fibroblast-like) เซลล์ถูกเลี้ยงต่อไป จนกระทั่ง 10 passage และถูกเก็บไว้ทุกๆ ครั้ง ที่อุณหภูมิ -196 °C ในไนโตรเจนเหลว ได้ผลการศึกษาว่าอาหารเลี้ยงเซลล์ทั้งสองสูตร และที่อุณหภูมิทั้งสองระดับคือ 28 °C และ 37 °C สามารถใช้เลี้ยงเซลล์ปฐมภูมิจระเข้น้ำจืดพันธุ์ไทยได้สําเร็จ แต่การใช้ซีรั่มลูกวัวในการเลี้ยงเซลล์จระเข้นั้นสามารถนํามาปรับใช้ได้ง่ายกว่าการใช้พลาสมาของจระเข้เองเนื่องจาก ซีรั่มลูกวัวนั้นหาได้ในทางการค้าทั่วไป