การใช้เซริซินในการยับยั้งการเจริญเติบโตของราน้ำและการใช้ทดแทนซีรัมในการเพาะเลี้ยงเซลล์

บทคัดย่อ

เซริซินเป็นโปรตีนกาวที่พบตามธรรมชาติมีหน้าที่ยึดเส้นใยไฟโบรอินของรังไหม ซึ่งถูกลอกออกในขั้นตอนการผลิตเส้นไหมดิบ ในการวิจัยครั้งนี้ได้ทําการสกัดโปรตีนเซริซินจากรังไหมของดักแด้ไหม (Bombyx mori L.) 2 สายพันธุ์ คือ นางน้อยศรีสะเกษ และยูบี1 โดย 3 วิธี ได้แก่ 1) การต้มใน 1.2% กรดซิตริก 2) การต้มในน้ำกลั่น และ 3) การต้มใน 8 M ยูเรีย ที่เติม 2% เบต้า-เมอร์แคปโทเอธานอล ที่อุณหภูมิ 80^oC จากนั้นนําของเหลวจากวิธีการต้มใน 1.2% กรดซิตริกมาเตรียมผงซิริซิน ทําการวิเคราะห์แบบแผนโปรตีนด้วยเทคนิค sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) และทดสอบคุณสมบัติเซริซินในการยับยั้งการเจริญเติบโตของราน้ำ Saprolegnia diclina โดยการแช่เส้นใยราในสารละลายเซริซินความเข้มข้นและเวลาต่างกัน
ก่อนนําไปเลี้ยงบนอาหาร GY รวมทั้งทดสอบความสามารถในการใช้เซริซินทดแทนซีรัมในการเพาะเลี้ยงเซลล์ A549 human lung alveolar ผลการวิจัยพบว่าเซริซินที่สกัดได้มีน้ำหนักโมเลกุลอยู่ระหว่าง 5 ถึง 116 กิโลดาลตัน และการแช่เส้นใยรา S. diclina ในสารละลายเซริซินสามารถยับยั้งความหนาแน่นของเส้นใยราได้ โดยการแช่เส้นใยในสารละลายเซริซินจากพันธุ์ยูบี1 ที่ความเข้มข้นร้อยละ 3 เป็นเวลา 120 นาทีสามารถยับยั้งอัตราการเจริญเติบโตของราน้ำได้มากที่สุดและแตกต่างจากกลุ่มควบคุมอย่างมีนัยสําคัญ (p<0.05) นอกจากนี้พบว่าการเพาะเลี้ยงเซลล์ A549 human lung alveolar ในอาหาร Ham’s ที่มีเซริซินเข้มข้น 0.5% จากพันธุ์นางน้อยศรีสะเกษและยูบี1 เมื่อเวลาผ่านไป 72 ชม. มีเซลล์ที่มีชีวิตจำนวน 2.75 x 10⁴ และ 2.5 x 10⁴ เซลล์/มล. ตามลำดับ ซึ่งใกล้เคียงกับกลุ่มควบคุมที่ใช้ Fetal bovine serum ที่มีจํานวนเซลล์ 3 x 10⁴ เซลล์/มล.ดังนั้น เซริซินจึงเป็นอีกทางเลือกหนึ่งในการใช้เป็นสารควบคุมการเจริญของเชื้อราและเป็นสารทดแทนซีรัมในการเพาะเลี้ยงเซลล์ได้