คุณสมบัติของเอนไซม์ฟีนอลออกซิเดสและการตอบสนองต่อการเหนี่ยวนำ ด้วยไวรัสตัวแดงดวงขาวในกุ้งขาว

บทคัดย่อ

เอนไซม์ฟีนอลออกซิเดสเป็นรูปแบบที่ active ของโปรฟีนอลออกซิเดส ซึ่งเป็นเอนไซม์หลักของครัสเตเชียน รวมทั้งกุ้งที่มีบทบาทสำคัญในการป้องกันตนเองต่อการติดเชื้อก่อโรค ในงานวิจัยนี้ ได้ทำให้เอนไซม์ฟีนอลออกซิเดส (phenoloxidase, PO) บริสุทธิ์บางส่วนจากฮีโมไซท์ของกุ้งขาวโดยการแยกด้วยคอลัมน์ Q-Sepharose และการทำโพลีอะคริลาไมด์เจล อิเล็กโทรฟอรีซิสแบบเตรียม พบว่าเอนไซม์ PO บริสุทธิ์บางส่วนมีมวลโมเลกุล 457 kDa เมื่อวิเคราะห์โดยโพลีอะคริลาไมด์เจล อิเล็กโทรฟอรีซิสแบบไม่แปลงสภาพ และมีจลนศาสตร์แบบไฮเพอร์โบลา โดยมีค่า K_M และ V_max สำหรับ L-DOPA (3,4-dihydroxyphenyl-L-alanine) เป็น 10 mM และ 0.014 A490/min ตามลำดับ และมีความจำเพาะต่อสับสเตรท dopamine, catechol และ pyrogallol แต่ไม่จำเพาะต่อ tyrosine เอนไซม์ PO นี้ถูกกระตุ้นได้ด้วยเอนไซม์ทริปซิน ลามินาริน ลิโพโพลีแซคคาไรด์และโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ในการศึกษาการตอบสนองของเอนไซม์ PO ต่อการเหนี่ยวนำด้วยไวรัสตัวแดงดวงขาว (white spot syndrome virus, WSSV) พบว่าแอคทิวิทีของเอนไซม์ PO ในฮีโมไซท์ของกุ้งที่ถูกฉีดด้วย WSSV เพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่องและเพิ่มสูงสุดที่ 18 ชั่วโมง หลังการฉีด แล้วมีค่าลดลง ในขณะที่กุ้งชุดควบคุมซึ่งฉีดด้วยน้ำเกลือมีระดับแอคทิวิทีไม่แตกต่างกันที่เวลาต่าง ๆ ผลการทดลองเหล่านี้บ่งชี้ว่าเอนไซม์ PO สามารถถูกกระตุ้นได้ และอาจเกี่ยวข้องในระบบภูมิคุ้มกันของกุ้งที่ตอบสนองต่อการติดเชื้อไวรัสก่อโรค