การเปรียบเทียบการสกัดอาร์เอ็นเอสามวิธีเพื่อใช้ในการศึกษา การแสดงออกของยีนด้วยเทคนิค RT-qPCR จากพืชวงศ์พริกไทย

บทคัดย่อ

พืชในวงศ์พริกไทยเป็นพืชสมุนไพรที่อยู่คู่สังคมไทยมานาน พบว่าสารเซสควิเทอร์ปีนซึ่งเป็นสารออกฤทธิ์ ในพืชกลุ่มนี้มีฤทธิ์ทางเภสัชวิทยาที่น่าสนใจ แต่มีราคาสูงเนื่องจากโครงสร้างโมเลกุลที่ซับซ้อน ทำให้ยากต่อการผลิตโดยกระบวนการเคมี การใช้เทคโนโลยีชีวภาพเข้ามาช่วย จึงเป็นทางเลือกที่จะสามารถผลิตสารที่มีคุณภาพดีและราคาถูกได้ ในการนี้ต้องทราบการควบคุมการแสดงออกของยีนสำหรับเอนไซม์ในวิถีการสังเคราะห์สาร ซึ่งต้องการอาร์เอ็นเอที่มีคุณภาพดีแต่ปัญหาอุปสรรคที่พบในการสกัดอาร์เอ็นเอจากพืชวงศ์นี้คือ ในใบพืชมีสารประกอบฟีโนลิคสูงและมีคลอโรฟิลล์สูง วัตถุประสงค์ของงานวิจัยชิ้นนี้เพื่อที่จะหาวิธีการที่มีประสิทธิภาพที่จะสามารถสกัดแยกเอาอาร์เอ็นเอที่มีคุณภาพสูงออกมาจากใบพลู ใบชะพลู และใบดีปลี จากการเปรียบเทียบวิธีสกัด
อาร์เอ็นเอโดยใช้ RNeasy^® Plant Mini kit (QIAGEN^®), TRIzol^® Reagent (Life technologies^TM) และ EasyRED^TM Total RNA Extraction (iNtRON Biotechnology) พบว่าการใช้ชุด RNeasy^® Plant เป็นวิธีการที่มีประสิทธิภาพที่สุด สามารถสกัดอาร์เอ็นเอที่มีคุณภาพสูง ปริมาณสม่ำเสมอ จากพืชทั้งสามชนิดที่ทดสอบ เมื่อนำอาร์เอ็นเอไปวิเคราะห์การแสดงออกของยีนด้วยเทคนิค RT-qPCR พบว่าอาร์เอ็นเอนี้สามารถใช้เป็นต้นแบบในการเพิ่มปริมาณทรานสคริปต์ของ Actin และ Sesquiterpene synthase ได้ ชุดสกัดอาร์เอ็นเอ RNeasy^® Plant จึงเป็นวิธีการที่เหมาะสมสำหรับการสกัดอาร์เอ็นเอจากพืชวงศ์พริกไทยเพื่อใช้ในการศึกษาการแสดงออกของยีนและการศึกษาพืชในระดับโมเลกุล