การตกผลึกและการวิเคราะห์การเลี้ยวเบนรังสีเอ็กซ์ของเอนไซม์ Os4BGlu18 จากข้าว

บทคัดย่อ

เอนไซม์ Os4BGlu18 จากข้าว ถูกเสนอว่าเป็นเอนไซม์ในกลุ่มโมโนลิกนอลเบตา-กลูโคซิเดส ซึ่งพบว่าสามารถย่อยสารในกลุ่มโมโนลิกนอลกลูโคไซด์สับสเตรท ซึ่งประกอบด้วย coniferin, syringin, และ p-coumatyl alcohol glucoside ได้อย่างมีประสิทธิภาพมากกว่าสับสเตรทจากธรรมชาติชนิดอื่น ๆ เอนไซม์ Os4BGlu18 ถูกผลิตในแบคทีเรีย Escherichia coli ด้วยการรวมเข้ากับ thioredoxin-His₆ tag และถูกทำให้บริสุทธิ์ด้วย immobilized metal affinity chromatography (IMAC) คอลัมน์ จากนั้น ด้านปลายอะมิโนของเอนไซม์ Os4BGlu18 ที่มี thioredoxin-His₆ tag อยู่ถูกตัดออกและทำให้บริสุทธิ์อีกครั้งด้วย IMAC คอลัมน์ การตกผลึกเอนไซม์ Os4BGlu18 ด้วยวิธี microbatch ประสบความสำเร็จโดยพบผลึกรูปร่างกลมยาวมากมาย ในสารตกผลึกที่ประกอบด้วย 0.1 โมลาร์ Tris-HCl, pH 8.5 และ 25% polyethylene glycol 3350 ที่อุณหภูมิ 15 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 อาทิตย์ ผลึกของเอนไซม์ Os4BGlu18 แบบอิสระและแบบที่รวมอยู่กับ 2-deoxy-2-fluoroglucose (G2F) สามารถเลี้ยวเบนรังสีเอ็กซ์ที่ National Synchrotron Radiation Research Center (NSRRC) ประเทศไต้หวัน ได้ด้วยความละเอียด 6.5 และ 7.0 อังสตรอม ตามลำดับ การวิเคราะห์ทางด้านผลึกศาสตร์ของเอนไซม์ Os4BGlu18 อิสระพบว่ามีดัชนีออร์โธรอมบิกสเปซกลุ่ม P2₁2₁2₁ และขนาดของยูนิตเซลล์มีค่า a=163.8 อังสตรอม, b=167.4 อังสตรอม และ c=240.2 อังสตรอม สำหรับผลึกของเอนไซม์ที่รวมอยู่กับ G2F พบว่ามีดัชนีออร์โธรอมบิกสเปซกลุ่ม P4₂2₁2 และขนาดของยูนิตเซลล์มีค่า a=164.5 อังสตรอม, b=164.5 อังสตรอม และ c=241.0 อังสตรอม