การพัฒนาวิธี Semi-Nested PCR เพื่อใช้ในการตรวจหา Demodex folliculorum และ D. brevis

Main Article Content

ปวันรัตน์ ตรีขัน
กัญญรัตน์ กรัยวิเชียร
อัจฉรา ภูมี
เผด็จ สิริยะเสถียร

บทคัดย่อ

ไร Demodex จัดเป็นปรสิตภายนอก อาศัยในรูขุมขน มีขนาดเล็ก ซึ่งสามารถพบไรนี้ได้สองสายพันธุ์ในมนุษย์ คือ demodex folliculorum และ D. brevis ไรทั้งสองชนิดสามารถแยกกันโดยดูลักษณะภายนอกในระยะตัวเต็มวัย แต่ในระยะอื่นโดยเฉพาะ ไข่ ตัวอ่อนไม่สามารถแยกความแตกต่างได้ ทำให้มีปัญหาในการศึกษาทางระบาดวิทยา งานวิจัยนี้จึงได้นำเทคนิคทางอณุชีววิทยามาใช้ในการตรวจหา และจำแนกสายพันธุ์ของไร Demodex ที่พบในมนุษย์ ซึ่งได้ทำการออกแบบไพร์เมอร์ที่มีความจำเพราะต่อยีน 18SrRNA โดยที่ยีนตำแหน่งนี้นิยมใช้ในการศึกษาสายวิวัฒนาการในปรสิตจำพวกไร (Acari) เนื่องจากมีความหลากหลายทางพันธุกรรมสูง โดยทำการสกัดดีเอ็นเอจากผิวหนังและเพิ่มปริมาณ DNA ด้วยเทคนิค Semi-Nested PCR ซึ่งจากผลการทดลองสามารถจำแนกไร Demodex ทั้งสองสายพันธุ์ได้และผลของผลิตภัณฑ์ PCR ที่มีความแตกต่างกันโดย D.folliculorum ให้ผลิตภัณฑ์ PCR ประมาณ 382 bp และ D.brevis ให้ผลิตภัณฑ์ PCR ประมาณ 317 bp งานวิจัยนี้จะมีประโยชน์พื้นฐานในการพัฒนาศึกษาจำแนกสายพันธุ์ของไร Demodex ได้ถูกต้องแม่นยำและศึกษาความหลากหลายทางพันธุกรรมของเชื้อ Demodex และเพื่อการศึกษาทางระบาดวิทยาต่อไปในอนาคต ซึ่งรายงานเป็นการศึกษาครั้งแรกในการนำวิธีทางอณูชีววิทยามาใช้ในการศึกษาไร Demodex ที่พบในมนุษย์ในประเทศไทย

Article Details

บท
บทความวิจัย

References

Lacy N, Kavanagh K, Tseng SC. 2009. Under the lash: Demodex mites in human diseases. Biochem (Lond) 31(4): 2-6

Baima B, Sticherling M. 2002. Demodicidosis revisited. Acta Derm Venereol 82(1): 3-6

Andrews JR. 1982. The prevalence of hair follicle mites in

Caucasian New Zealanders. N Z Med J 95(711): 451-3

Aylesworth R, Vance JC. 1982. Demodex folliculorum and Demodex brevis in cutaneous biopsies. J Am Acad Dermatol 7(5): 583-9

Damian D, Rogers M. 2003. Demodex infestation in a child with leukaemia : treatment with ivermectin and permethrin. Int J Dermatol 42(9): 724-6.

Daberta M, Witalinskib W, Kazmierskic A, Olazanowshi Z, Dabert J. 2010. Molecular phylogeny of acariform motes (Acari, Arachnida): strong conflict between phylogenetic signal and long-branch attraction artfacts. Mol Phylogenet Evol 56: 222-41.

Murrell A, Dobson SJ, Walter DE, Campbell NJH, Shao R, Barker SC. 2005. Relationships among the three major lineages of the Acari (Arthropoda: Arachnida) inferred from small subunit rRNA: paraphyly of the parasitifomes with respect to the Opilioacariformes and relative rates of nucleotide substitution, Invert Syst 19: 383-9.

Zhao Ye, Xu JR, Hu L, Wu LP, Wang ZH. 2012. Complete sequence analysis of 18S rDNA based on genomic DNA extraction from individual Demodex mites (Acari: Demodicidae). Exp Parasitol 131(1): 45-51.

T. Maniatis, E.F. Fritsch, J. Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 2001, 5.40.

S. Kumar, K. Tamura, M. Nei, MEGA3: Integrated software for Molecular Evolutionary Genetics Analysis and sequence alignment. Brief Bioinform, 2004, 5(2): 150-63.